Nature Protocols：基于生物荧光共振能量转移的活细胞蛋白质-蛋白质相互作用成像
民咕咕
荧光共振能量转移(BRET)是荧光给体与荧光受体之间的能量转移。当供体和受体之间的距离小于10nm时，BRET的效率与距离的六次方成反比，因此它是一种受到广泛关注的近距离检测活细胞中蛋白-蛋白相互作用和构象重排的方法。在这类的实验中，其中一个靶蛋白被融合到荧光能量供体上，另一个蛋白被融合到荧光能量受体上。由于BRET供体不需要外部光源，因此不会导致光毒性或自发荧光，使得它成为了荧光成像的替代品。然而，BRET能量供体较低的信号输出限制了BRET成像的时间和空间分辨率。有鉴于此，加拿大蒙特利尔大学Michel Bouvier等人描述了最近针对检测设备和BRET探针方面的改进，能够显著提高BRET成像的分辨率，从而拓宽了BRET成像的应用领域。本文描述了三个主要阶段。首先，细胞制备和转染需要三天，包括细胞培养时间；其次，在显微镜设置的初始时间为60分钟之后，每个样本的图像采集时间为10-120分钟；最后，图像分析一般需要1-2小时，并讨论了荧光供体、荧光受体、相机和显微镜设备的选择，以及用于不同应用的采集模式。
参考文献：Hiroyuki Kobayashi, Louis-Philippe Picard, Anne-Marie Schönegge & Michel Bouvier*. Bioluminescence resonance energy transfer–based imaging of protein–protein interactions in living cells. Nature Protocols. 2019
DOI: 10.1038/s41596-019-0129-7
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