Anal. Chem: 利用脉冲-紫外辐射诱导的化学发光对酪氨酸及其产生和代谢酶的选择性测定的开发

念心

2022-08-08

众所周知，L-酪氨酸是蛋白质中不可缺少的组成部分，它是建立和维持人体氮平衡所必需的。酪氨酸是最具光反应性的氨基酸之一。基于此，长崎大学Naotaka Kuroda等人利用脉冲-紫外辐射诱导鲁米诺衍生物L-012化学发光（CL）方法测定酪氨酸，显示出非常强的 CL 响应。

本文要点：

（1）在 L-酪氨酸的脉冲紫外线照射下活性氧 (ROS) 大量形成；然后，这些 ROS 与 L-012 反应产生强 CL。在浓度为 0.03–50 μM 范围内，该方法强调L-酪氨酸呈线性，表现出优异的灵敏度和超选择性。使用 ROS 清除剂、HPLC 和质谱法研究了开发的 CL 方法的机理。L-酪氨酸结构的微小变化，包括羟基化、脱羟基化、磷酸化或脱羧基化，会导致 CL 的强烈降低。

（2）利用该方法的优异选择性，以非化学发光O-磷酸-l-酪氨酸作为底物，作者开发了一种用于测量碱性磷酸酶活性的CL 测定法，测定范围为 0.02-15 U/L，检测限 (LOD) 为 4 mU/L。

（3）CL 反应用于酪氨酸酶活性测定，因为这种酶可以将 L-酪氨酸转化为非化学发光的 L-多巴。在0.025–0.75 U/mL 范围内，CL 的降低与酪氨酸酶活性相关，LOD 为 1.5 mU/mL。与此同时，酪氨酸酶活性测定法成功应用于酪氨酸酶抑制剂曲酸和苯甲酸的IC₅₀测定。因此，用于测定 L-酪氨酸的新型脉冲紫外辐照 CL 方法不仅适用于L-酪氨酸的测定，而且还扩展到成功测定其产生和代谢酶及其抑制剂。

参考文献：

Naoya Kishikawa, Mahmoud El-Maghrabey, Ayaka Tsubokami, Hiroki Hori, and Naotaka Kuroda. Development of a Selective Assay of Tyrosine and Its Producing and Metabolizing Enzymes Utilizing Pulse-UV Irradiation-Induced Chemiluminescence. 

Anal. Chem. 2022

DOI:10.1021/acs.analchem.2c01593

https://doi.org/10.1021/acs.analchem.2c01593