Nature Methods：液滴微流体与按需喷射相结合的时间分辨冷冻电镜

NavyLIu

2023-08-20

单粒子低温电子显微镜（cryo-EM）可以重建不同构象蛋白质的高分辨率结构。蛋白质功能通常涉及短暂的功能构象，并可以使用时间分辨冷冻电镜（trEM）进行解析。在trEM中，通过在EM网格上快速玻璃化蛋白质溶液，并在规定的延迟时间后阻止反应。然而，制作时间分辨率低于100 ms的trEM样本仍极具挑战性。在这里，荷语布鲁塞尔自由大学Rouslan G. Efremov报道了液滴微流体与按需喷射相结合的时间分辨冷冻电镜。

本文要点：

1) 作者报道了一种时间分辨低温柱塞的设计和实现，该柱塞将基于液滴的微流体混合器与激光诱导的微射流发生器相结合，从而实现低温EM网格的快速反应启动和插入冷冻。

2) 使用这种方法，作者实现了5ms的时间分辨率，并将蛋白质密度图重建为2.1Å的分辨率。GroEL:GroES伴侣蛋白复合物的trEM实验解决了复合物形成的动力学问题，并可视化了GroEL-ATP复合物的短寿命构象。

参考文献：

Stefania Torino et.al Time-resolved cryo-EM using a combination of droplet microfluidics with on-demand jetting Nature Methods 2023

DOI: 10.1038/s41592-023-01967-z

https://doi.org/10.1038/s41592-023-01967-z